實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
腹腔主動脈是人體的大動脈，直接延續(xù)于發(fā)自左心室的主動脈，胸腔主動脈，沿脊柱左側下行，主要負責腹腔臟器和腹壁的血液供應。動脈發(fā)生的一個主要因素是由于血管平滑肌細胞轉變成為了具有繁殖能力的表型。
近期的研究表明平滑肌細胞能表達鈣離子通道， ICAM-1和VCAM-1。其中ICAM-1和VCAM-1的表達可能是造成血管壁炎癥反應，并進一步造成血管的原因 。
因此，對動脈血管平滑肌細胞的體外培養(yǎng)和研究可用來發(fā)現(xiàn)和確定新的血管的靶向方法。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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腹腔主動脈組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1784 |
僅供科研研究實驗 |
細胞特性：
1）組織來源于實驗動物的正常腹腔主動脈組織。
2)細胞鑒定：平滑肌肌動蛋白（α-SMA）熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式：長梭形細胞，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF原代平滑肌細胞培養(yǎng)體系 作為該細胞的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠內向整流型鉀離子通道亞家族J成員5(KCNJ5)elisa檢測試劑盒
平滑肌細胞相關蛋白4抗體
MFSD1
1號染色體開放閱讀框177抗體
C1orf177
組織血管緊張素Ⅰ轉化酶（ACE）總活性比色法定量檢測試劑盒
人多藥耐藥相關蛋白(MRP)elisa檢測試劑盒免費代測
大鼠干細胞生長因子(SCF)elisa檢測試劑盒
魚胞漿型磷脂酶A2A(cPLA2A)elisa分析檢測試劑盒
磷酸化磷脂酰肌醇激酶調節(jié)亞單位gamma抗體
phospho-PIK3R3 (Tyr199)
卷曲螺旋結構域蛋白5抗體
CCDC5
Toll樣受體9抗體 Anti-TLR9/CD289
多腺苷二磷酸多聚酶16抗體 Anti-PARP16
神經(jīng)叢蛋白A4抗體 Anti-Plexin A4
細胞外基質蛋白2抗體 Anti-SPARCL1/Ecm2
Cy5標記的兔抗豚鼠IgG H&L
Rabbit Anti-Guinea Pig IgG H&L / Cy5
胰腺彈性蛋白酶3B抗體
Elastase 3B
鋅指蛋白BED4抗體 Anti-ZBED4
生殖細胞增殖相關蛋白NANOS2抗體 Anti-NANOS2
腫瘤血管內皮調節(jié)蛋白Robo4抗體 Anti-Robo4
骨形態(tài)發(fā)生抑制蛋白SOST抗體 Anti-Sclerostin
大鼠17羥皮質類固醇(17-OHCS)elisa分析檢測試劑盒
小鼠腹腔主動脈平滑肌細胞綿羊基質金屬蛋白酶3(MMP3)elisa分析檢測試劑盒
WB二抗稀釋液 100ml
Carcinoembryonic antigen; Carcinoembryonic antigen related cell adhesion molecule 5; Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5; CD66e; CD66e antigen; CEACAM5; CEAM5_HUMAN; DKFZp781M2392; Meconium antigen 100.
小鼠腹腔主動脈平滑肌細胞
大鼠腎小管上皮細胞
幼蚊細胞；C6/36
XWLC-05云南宣威人肺腺癌細胞系
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術等。