實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
小鼠海馬神經元細胞分離自海馬體；海馬體(Hippocampus)，又名海馬回、海馬區(qū)、大腦海馬，海馬體主要負責記憶和學習。海馬神經元細胞是海馬區(qū)的主要細胞組成，主要功能是參與近期記憶、情緒及內臟功能調節(jié)、是老年性癡呆、癲癇等的主要病灶之一。海馬屬于大腦的邊緣系統(tǒng)，在學習、記憶、情緒反應及神經系統(tǒng)的病理生理變化等方面有重要作用，而且海馬組織是神經系統(tǒng)內主要的神經干細胞聚集區(qū)，具有高度序化板層結構和神經元相對獨立分布的特點，境界相對清晰，便于取材，因此，海馬神經元體外培養(yǎng)模型被廣大基礎醫(yī)學和臨床醫(yī)學研究者當做理想的實驗模型。海馬神經元細胞培養(yǎng)是研究神經細胞生物學特性和外源干擾因素作用(細胞因子)的有效細胞模型，其在神經生物學，發(fā)育生物學體外實驗研究中已被廣泛應用。
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組織來源 |
產品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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腦海馬體 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1948 |
僅供科研研究實驗 |
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml）
培養(yǎng)基 含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 神經元細胞樣
傳代特性 屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介：
公司實驗室分離的小鼠海馬神經元細胞采用胰蛋白酶消化法、神經元培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結合化學試劑抑制法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的小鼠海馬神經元細胞經β-Tubulin熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產品：
土壤α-葡萄糖苷酶（S-α - GC）測試盒
人S100鈣結合蛋白A8/鈣粒蛋白A(S100A8)elisa分析檢測試劑盒
細胞組織B（CATHEPSIN B）活性熒光定量檢測試劑盒
小鼠絡絲蛋白(RL)elisa檢測試劑盒
大鼠甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)elisa檢測試劑盒
小鼠腫瘤壞死因子配體超家族成員13(TNFSF13)elisa檢測試劑盒
大鼠激肽原(KNG)elisa分析檢測試劑盒
組織SYK激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
人抗精子抗體（AsAb）elisa檢測試劑盒
AF750標記的白介素1β抗體 IL-1 Beta, Alexa Fluor 750 conjugated
APC-Cy7標記人CD25單克隆抗體 human CD25/APC-Cy7
精子發(fā)生相關蛋白9抗體 SPATA9
卷曲螺旋結構域蛋白92抗體 CCDC92
TBC結構域家族D4蛋白抗體 phospho-TBC1D4 (Ser588)
T細胞易位蛋白2抗體 LMO2
唾液酸糖蛋白受體1抗體 ASGPR1
味覺受體蛋白家族2亞基5抗體 TAS2R5
HEAT重復內含蛋白1蛋白抗體 HEATR1
IQCK蛋白抗體 IQCK
配體依賴核受體共抑制因子抗體 MLR2
橋粒斑菲素蛋白4抗體 Plakophilin 4
富含半胱氨酸蛋白質MIG7抗體 MIG7
鈣結合蛋白D28K重組兔單克隆抗體 Calbindin
抑癌蛋白TCHP抗體 TCHP
增強型黃色熒光蛋白單克隆抗體 EYFP
大鼠E3-RSIκB elisa分析檢測試劑盒
小鼠海馬神經元細胞小鼠防御素α1(DEFα1)elisa檢測試劑盒
大鼠elisa分析檢測試劑盒
Cadherin 6; Cadherin6; Cadherin-6; Cadherin 6 type 2; Cadherin fetal kidney; Cadherin6; CDH 6; CDH6; KCAD; Kidney cadherin; CADH6_HUMAN.
小鼠海綿體內皮細胞
兔視網膜神經節(jié)細胞
M2-10B4小鼠骨髓纖維原細胞
HT29 gluc C1白種人結腸腺癌細胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經過的心臟破碎組織塊經過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據細胞數(shù)量種植到對應的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術等。