實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
小鼠肝竇內皮細胞細胞分離自肝臟組織；肝臟是身體內以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質的合成等作用；肝臟也**消化系統中之膽汁。肝臟是機體內臟里大的器官，位于機體中的腹部位置，在右側橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機體消化系統中大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機體位置和形態(tài)結構：肝臟位于右上腹，隱藏在右側膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復蓋，僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接。肝竇內皮細胞（SEC）是肝臟內所占比例的非實質細胞，位于肝竇腔與肝細胞之間，具有物質轉運、吞噬、抗原提呈、耐受等功能。SEC由于擁有一般細胞所沒有的窗孔結構、細胞間連結松散、內皮下缺少基底膜而使其具有高度通透性，從而達到快速交換各種大小分子的目的。肝在遭到多種病原侵襲時，肝竇內皮細胞窗孔逐漸減少或消失，內皮下基膜形成，產生類似于連續(xù)型的結構，這一過程稱為肝竇化。它由多種因素引起，其過程極復雜，在多種肝病的發(fā)病前期階段均有出現，近年來受到廣泛關注。
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組織來源 |
產品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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肝臟組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1817 |
僅供科研研究實驗 |
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 內皮細胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介：
公司實驗室分離的小鼠肝竇內皮細胞采用混合酶灌流消化、反復低速離心、密度梯度離心法，并通過內皮細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的小鼠肝竇內皮細胞經CD31、CD14熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產品：
小鼠補體蛋白5(C5)elisa分析檢測試劑盒
人假定蛋白LOC677168 elisa分析檢測試劑盒
正常女性人體肝組織微粒體組分（5毫克/毫升）
病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒 50次
大鼠維生素C(VC)elisa檢測試劑盒
小鼠載脂蛋白A1(Apo A1)elisa檢測試劑盒
大鼠核因子κB抑制因子β(IκBβ)elisa檢測試劑盒
細胞ERK1激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
人胱天蛋白酶8(Casp-8)elisa分析檢測試劑盒
長鏈烯脂酰輔酶A水化酶抗體 ECHS1
脂肪甘油三酯脂酶抗體 Adipose Triglyceride Lipase
鈣/鈣調素依賴蛋白激酶1β/CaMKIβ抗體 PNCK
甘油二酯?；D移酶2抗體 DGAT2
IKK激酶相互作用蛋白抗體 IKIP
Ki67蛋白抗體 Ki-67
前列腺相關蛋白MSMP抗體 MSMP
去泛素化酶15抗體 USP15
APC標記人HLA-DR單克隆抗體 human HLA-DR/APC
B Raf單克隆抗體 BRAF
跨膜蛋白106B抗體 TMEM106B
蛋白激酶A4受體抗體 EphA4 R
X連鎖生長調控因子GCFX抗體 SHOX
β半乳糖苷酶抗體 Beta galactosidase
細胞凋亡抑制因子3α抗體 Survivin 3 alpha
細胞周期蛋白依賴性激酶調節(jié)亞基1抗體 CKS1
大鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPRⅡ)elisa檢測試劑盒
小鼠肝竇內皮細胞小鼠晚期糖基化終末產物(AGEs)elisa分析檢測試劑盒
人β2轉鐵蛋白(β2TF)elisa檢測試劑盒
Apoptotic protein NDPP 1; Apoptotic protein NDPP1; CARD 8; CARD inhibitor of NF kappa B activating ligand; CARD inhibitor of NF kappaB activating ligand; CARD inhibitor of NF kappaB activating ligands; CARD-inhibitor of NF-kappa-B-activating ligand; CARD8; CARD8_HUMAN; CARDINAL; Caspase recruitment domain containing protein 8; Caspase recruitment domain family member 8; Caspase recruitment domain protein 8; Caspase recruitment domain-containing protein 8; DACAR; NDPP 1; NDPP1; TUCAN; Tumor up regulated CARD containing antagonist of CASP9; Tumor up regulated CARD containing antagonist of caspase 9; Tumor up-regulated CARD-containing antagonist of CASP9; Tumor upregulated CARD containing antagonist of CASP9.
小鼠肝內膽管上皮細胞
兔胃平滑肌細胞
GFP標記小鼠成肌細胞;C2C12-GFP
Hs 578T人乳腺癌細胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經過的心臟破碎組織塊經過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據細胞數量種植到對應的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術等。