細胞簡介：
人椎間盤纖維環(huán)細胞分離自椎間盤組織；椎間盤是位于脊柱兩椎體之間，由軟骨板、纖維環(huán)、髓核組成的一個密封體。上下有軟骨板，是透明軟骨復蓋于椎體上，下面骺環(huán)中間的骨面。上下的軟骨板與纖維環(huán)一起將髓核密封起來。纖維環(huán)由膠原纖維束的纖維軟骨構(gòu)成，位于髓核的四周。纖維環(huán)的纖維束相互斜行交叉重疊，使纖維環(huán)成為堅實的組織，能承受較大的彎曲和扭轉(zhuǎn)負荷。纖維環(huán)的前側(cè)及兩側(cè)較厚，而后側(cè)較薄。纖維環(huán)的前部有強大的前縱韌帶，后側(cè)的后縱韌帶較窄、較薄。纖維環(huán)細胞密度為9000個細胞/mm3，其外層的細胞呈梭型，主要屬于纖維細胞，內(nèi)層細胞呈圓形，主要屬于軟骨細胞。在培養(yǎng)的情況下，用透射電鏡觀察則有許多共同的超微結(jié)構(gòu)表現(xiàn)，它們的核較圓，核仁較明顯。細胞質(zhì)內(nèi)可見大量的附有核糖體顆粒的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。細胞質(zhì)內(nèi)線粒體多，為橢圓形，有的可看到雙層單位膜，由單位膜包繞初級深酶體和次級深酶體。細胞質(zhì)內(nèi)有一系列的扁平囊及小泡主成的高爾基復合體和分泌顆粒，纖維環(huán)細胞合成分泌蛋白多糖及膠原纖維的能力很旺盛，保證纖維環(huán)生理代謝活動所需的構(gòu)造物質(zhì)的供給。一但這種供給減少，纖維環(huán)的生物性能就會減弱，椎間盤開始退變。
|
組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
|
椎間盤組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1438 |
僅供科研研究實驗 |
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介：
公司實驗室分離的人椎間盤纖維環(huán)細胞采用膠原酶-中性蛋白酶聯(lián)合消化法并結(jié)合軟骨細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實驗室分離的人椎間盤纖維環(huán)細胞經(jīng)Ⅰ型膠原蛋白熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術(shù)等。實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
公司正在出售的產(chǎn)品：
BMP-9ELISAKit
倉鼠前列腺素E2(PGE2)elisa分析檢測試劑盒
PGE2 ELISA Kit
人毒蕈堿型乙酰膽堿受體M2(mAChRM2)自身抗體elisa分析檢測試劑盒
HumanmuscarinicacetylcholinereceptorM2(mAChRM2)autoantibodyELISAkit
小鼠白介素27(IL27)elisa檢測試劑盒
大鼠1,25二羥基維生素D3(1,25 DHVD3)elisa檢測試劑盒
鈣鈉交換體（NCX）蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒
犬I 型膠原蛋白elisa檢測試劑盒
INTS1蛋白抗體
INTS1
炭疽桿菌致死因子LF抗體
Anthrax lethal factor
（AMYLASE）定性檢測試劑盒
兔γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶1(GGT1)elisa檢測試劑盒
大鼠尿調(diào)蛋白(UMOD)elisa檢測試劑盒
細胞凋亡誘導（DNA合成抑制）試劑盒
多通道膜蛋白PTCHD2抗體
PTCHD2
癌胚抗原相關(guān)細胞粘附分子16抗體
CEACAM16
泛素蛋白連接酶2N抗體 Anti-Ube2N/UBC13
原鈣粘蛋白γB1抗體 Anti-PCDHGB1
細胞膜調(diào)控蛋白Paralemmin 1抗體 Anti-Paralemmin 1
粘結(jié)蛋白SA1抗體 Anti-SA1/Nuclear protein stromal antigen 1
堿性磷酸酶（AP）標記的羊抗雞IgG H&L
人椎間盤纖維環(huán)細胞Goat Anti-Chicken IgG H&L / AP
鋅指蛋白855抗體
2700045P11Rik; CKAMP44; Cystine knot AMPAR modulating protein; DKFZp686D24206; DKFZp686E24206; FLJ10015; FLJ37653; FLJ58277; FLJ99079; FLJ99234; Protein shisa-9; Shisa homolog 9 (Xenopus laevis); Shisa homolog 9; shisa9; SHSA9_HUMAN.
兔腸巨噬細胞
小鼠甲狀腺成纖維細胞
NCI-H661[h661]人大細胞肺癌細胞
DU145人前列腺癌細胞