細胞簡介：
人Ⅱ型肺泡上皮細胞分離自肺組織；肺泡由單層上皮細胞構(gòu)成的半球狀囊泡。肺中的支氣管經(jīng)多次反復(fù)分枝成無數(shù)細支氣管，它們的末端膨大成囊，囊的四周有很多突出的小囊泡，即為肺泡。小肺泡細胞，又稱I型肺泡細胞，厚約0.1微米，基底部是基底膜，無增殖能力。大肺泡細胞，又稱Ⅱ型肺泡細胞，分泌表面活性物質(zhì)(二棕櫚酰卵磷脂)，以降低肺泡表面張力。Ⅱ型肺泡細胞位于Ⅰ型肺泡細胞之間，數(shù)量較Ⅰ型肺泡細胞多，但覆蓋面積比Ⅰ型肺泡細胞小。細胞立方形或圓形,頂端突入肺泡腔。細胞核圓形，胞質(zhì)著色淺、呈泡沫狀。電鏡下，細胞游離而有少量微絨毛，胞質(zhì)內(nèi)富含線粒體和溶酶體，有較發(fā)達的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體。核上方有較多的分泌顆粒，電子密度高、大小不等，直徑約0.1-1.0μm顆粒內(nèi)含有平行排列的板層狀結(jié)構(gòu)，稱為嗜餓性板層小體。小體內(nèi)的主要成分為磷脂，以二棕櫚酰卵磷脂為主，此外還有糖胺多糖及蛋白質(zhì)等。顆粒內(nèi)物質(zhì)釋放出來后，在肺泡表面形成一層粘液層，稱為表面活性物質(zhì)(surfactant)。表面活性物質(zhì)有降低肺泡表面張力、穩(wěn)定肺泡大小的作用。呼氣時肺泡縮小，表面活性物質(zhì)密度增加，表面張力降低，防止肺泡過度塌陷；吸氣時肺泡擴張，表面活性物質(zhì)密度減小，肺泡回縮力加大，可防止肺泡過度膨脹。表面活性物質(zhì)的缺乏或變性均可引起肺不張，過度通氣可造成表面活性物質(zhì)缺乏；吸入毒氣可直接破壞表面活性物質(zhì)。Ⅱ型肺泡細胞有分裂、增殖并分化為Ⅰ型肺泡細胞的潛能，故具有修復(fù)受損傷上皮的作用。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 | 用途 |
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肺組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1254 |
僅供科研研究實驗 |
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基 含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
傳代特性 可傳1-2代左右
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介：
質(zhì)量檢測：
實驗室分離的人Ⅱ型肺泡上皮細胞經(jīng)SP-C熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、酵母等。
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術(shù)等。公司正在出售的產(chǎn)品：
| 羥脯氨酸糖蛋白(HRGP)ELISA試劑盒 | B細胞遷移基因4抗體 |
| 羥脯氨酸(Hyp)ELISA試劑盒 | 細胞色素P450 F2抗體 |
| 羥賴氨酸糖苷(HOLG)ELISA試劑盒 | 有絲分裂蛋白BUB3重組兔單克隆抗體 |
| 羥賴氨酸(Hyl)ELISA試劑盒 | 細胞色素P450 4V2抗體 |
| 羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶(HMG-CoAR)ELISA試劑盒 | BXDC1蛋白抗體 |
| 羥甲基戊二酸單酰輔酶A(HMG-CoA)ELISA試劑盒 | 細胞色素P450 4X1抗體 |
| 羥基賴正己氨酸(HLNL)ELISA試劑盒 | 10號染色體開放閱讀框140抗體 |
| 羥基膠原吡啶交聯(lián)(OH-PYD)ELISA試劑盒 | 細胞色素P450 IVF8抗體 |
| 強啡肽(Dyn)ELISA試劑盒 | 10號染色體開放閱讀框30抗體 |
| 潛伏膜蛋白1(LMP-1)ELISA試劑盒 | 細胞因子樣蛋白1抗體 |
| 前心鈉肽(Pro-ANP)ELISA試劑盒 | CULLIN抗體 |
| 前鐵調(diào)素(Pro-Hepc)ELISA試劑盒 | 細胞色素P450 26B抗體 |
| 前列腺特異性抗原(PSA)ELISA試劑盒 | 10號染色體開放閱讀框63抗體 |
| 前列腺素H2(PGH2)ELISA試劑盒 | 細胞色素P450 2C11抗體 |
| 前列腺素F2α(PGF2α)ELISA試劑盒 | 11號染色體開放閱讀框65抗體 |
| 前列腺素F(PGF)ELISA試劑盒 | 細胞色素P450 2D10抗體 |
| 前列腺素E2(PGE2)ELISA試劑盒 | 11號染色體開放閱讀框67抗體 |
| 前列腺素E1(PGE1)ELISA試劑盒 | 人II型肺泡上皮細胞細胞色素P450 3A5抗體 |
| 前列腺素D2(PGD2)ELISA試劑盒 | 11號染色體開放閱讀框71抗體 |
| 前列腺素A1(PGA1)ELISA試劑盒 | 細胞角蛋白15重組兔單克隆抗體 |
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。