產(chǎn)品名稱：NCI-H1299人非小細胞肺癌細胞

細胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	NCI-H1299人非小細胞肺癌細胞	英文名稱	NCI-H1299:NCIH1299
產(chǎn)品貨號	A01X871	培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%
生長特性	貼壁細胞	細胞形態(tài)	上皮細胞樣
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
組織來源	肺癌：非小細胞肺癌；轉(zhuǎn)移灶：結(jié)	用途	僅供科研研究實驗

生長特性 貼壁細胞

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

生長培養(yǎng)基 RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

背景描述 NCI-H1299細胞來源于一個結(jié)轉(zhuǎn)移，患者接受了初期放療。NCI-H1299細胞均一性的部分缺失p53蛋白，并缺少p53蛋白表達。NCI-H1299細胞可以合成0.1pmol/毫克蛋白的NMB蛋白，而不合成促胃液釋放肽(GRP)。

年齡（性別） 男；43歲

組織來源 肺癌：非小細胞肺癌；轉(zhuǎn)移灶：結(jié)

細胞類型 腫瘤細胞

腫瘤類型 肺癌細胞

生物等級 1

倍增時間 ~30 hours

基因表達情況 These cells stain positive for keratin and vimentin but are negative for neurofilament triplet protein. neuromedin B, The cells have a homozygous partial deletion of the p53 protein, and lack expression of p53 protein. The cells produce neuromedin B.

保藏機構(gòu) ATCC; CRL-5803

TOMM40L       線粒體核糖體蛋白L39

DNA結(jié)合蛋白Mel18抗體       Mel18

含纈酪肽蛋白抗體  Anti-VCP       TOMM40L蛋白抗體

選擇性胸腺細胞相關(guān)蛋白抗體  Anti-THEMIS       環(huán)指蛋白135抗體  Anti-RNF135

沉默調(diào)節(jié)蛋白5抗體  Anti-SIRT5       骨保護蛋白/護骨素抗體  Anti-OPG

DNAJC13蛋白抗體       DNAJC13

突觸細胞粘附分子3抗體  Anti-Neuroligin 3      MrpL39

PSP抗體  Anti-Persephin       細胞粘附分子1抗體  Anti-SynCAM/TSLC1丙肝病毒NS5A反轉(zhuǎn)錄蛋白8抗體       HCV NS5A transactivated protein 8

CDK6蛋白表達西方雜交分析試劑盒       己糖激酶HK測試盒 48樣 紫外比色法

人IgM英文別名： human Immunoglobulin M; IgM from human serum; Human IgM Purified; Human IgM Protein (Native).       Human IgM

大鼠環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)elisa生化檢測試劑盒       cGMP ELISA Kit

兔基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP-1)elisa生化檢測試劑盒       MMP-1ELISAkit

E3泛素蛋白連接酶144B/環(huán)指蛋白144B抗體       IBRDC2

NCI-H1299人非小細胞肺癌細胞橋連整合因子蛋白抗體       BIN1

小鼠ⅩⅤ型膠原(COL15)elisa檢測試劑盒       酚氯仿法DNA萃取試劑盒

細胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細胞形態(tài)和生長密度達到90%時，進行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細胞，吹打細胞使其均勻分散。
（7）吸棄細胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。
（9）細胞凍存。