
細(xì)胞培養(yǎng)操作:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液(0.25%Trypsin)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1:3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3) 細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例;
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液,使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
商品屬性:
產(chǎn)品名稱
英文名稱
MUTZ-8
產(chǎn)品貨號
AXB7013
培養(yǎng)條件
80% alpha-MEM
(with ribo- and deoxyribonucleosides) + 20% h.i. FBS + 10 ng/ml GM-CSF or 10%
vol conditioned medium of cell line 5637 (DSMZ ACC 35)37 ℃, 5% CO2
生長特性
懸浮生長
細(xì)胞形態(tài)
圓形細(xì)胞
產(chǎn)品種屬
人
凍存條件
90% FBS + 10% DMSO
組織來源
外周血
用途
僅供科研研究實(shí)驗(yàn)
種屬來源;人
組織來源;外周血
性別年齡;女性,63歲
生長特性;懸浮生長
細(xì)胞形態(tài);圓形細(xì)胞
細(xì)胞規(guī)格;1 X 106cells/T25或1 mL凍存管
培養(yǎng)條件;80% alpha-MEM (with ribo- and
deoxyribonucleosides) + 20% h.i. FBS + 10 ng/ml GM-CSF or 10% vol conditioned
medium of cell line 5637 (DSMZ ACC 35)37 ℃, 5% CO2
凍存條件;90% FBS + 10% DMSO
傳代方法;1:2傳代,3-5天傳1代

公司正在出售的產(chǎn)品:

protein C Activation peptide 細(xì)胞纖毛內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)同源蛋白172抗體
A型流感病毒H5N1神經(jīng)氨酸酶1抗體 Influenza A Neuraminidase 1
小鼠球蛋白G4(IgG4)elisa檢測試劑盒 蛋白C激活肽抗體
小鼠p16基因甲基化檢測試劑盒 人Ⅱ型膠原代謝產(chǎn)物C2C(C2C)elisa檢測試劑盒
神經(jīng)突起生長誘導(dǎo)因子受體UNC5B抗體 Anti-UNC5H3/UNC5C 11號染色體開放閱讀框73抗體 Anti-C11orf73
22號染色體開放閱讀框39抗體 C22orf39
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磷酸乙醇胺轉(zhuǎn)移酶2抗體 Anti-PCYT2 絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1抗體 Anti-SPTLC1FRMD2蛋白抗體 FRMD2
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辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗雞IgG H&L Goat Anti-Chicken IgG H&L / HRP
犬CD4分子(CD4)elisa生化檢測試劑盒 CD4 ELISA kit
小鼠含球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨酸激酶1(Tie-1)elisa生化檢測試劑盒 Tie-1ELISAkit
猴超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)elisa生化檢測試劑盒 hs-CRP ELISA Kit
MUTZ-8人急性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞人二磷酸尿核苷葡糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶2家族肽B4(UGT2B4)elisa生化檢測試劑盒 UGT2B4ELISAKit
犀牛皮質(zhì)酮(CORT)elisa生化檢測試劑盒 大鼠激動異構(gòu)酶/細(xì)胞分裂素MB(CKMB)elisa生化檢測試劑盒
細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟:
(1)當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長密度達(dá)到90%時,進(jìn)行傳代。
(2)吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次,搖勻后棄掉。
(3)加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
(4)培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化,3min左右拿出,用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量,發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落,加入2倍量的胰蛋白酶中止消化,并吹打均勻,避免消化過度。
(5)細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi),1000rpm/min離心3~5min。
(6)吸棄上清,加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,吹打細(xì)胞使其均勻分散。
(7)吸棄細(xì)胞懸液,選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻,放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
(8)根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。
(9)細(xì)胞凍存。