商品屬性：
產品名稱
英文名稱
kyse30:kyse30
產品貨號
A01X816
培養(yǎng)條件
氣相：空氣，95%；CO2，5%,
生長特性
貼壁細胞
細胞形態(tài)
上皮細胞樣，帶有長的偽足
產品種屬
人
凍存條件
凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
組織來源
食管鱗狀上皮
用途
僅供科研研究實驗
生長特性 貼壁細胞
細胞形態(tài) 上皮細胞樣，帶有長的偽足
凍存條件
凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養(yǎng)方案A（默認）
生長培養(yǎng)基:
RPMI-1640＋Ham's F-12＋2mM L-Glutamine＋10% FBS＋1% P/S
培養(yǎng)條件:
氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃
推薦傳代比例 1:3-1:5
推薦換液頻率 2-3次/周
參考資料(來源文獻)
背景描述 Derived from well
differentiated invasive esophageal squamous cell carcinoma resected from middle
intra-thoracic esophagus of a 64-year-old Japanese man prior to treatment; cell
line Established from tumor cells heterotransplanted into athymic mice;
described in the literature to be heterotransplantable in athymic mice and to
carry p53 mutation and amplification of cERB B, MYC and CYCLIN D1
年齡（性別） 女性；64歲
組織來源 食管鱗狀上皮
細胞類型 腫瘤細胞
腫瘤類型 食管癌細胞
生物等級 BSL-1
倍增時間 ~20-30 hours
保藏機構 DSMZ; ACC-351 ECACC; 94072011 JCRB; JCRB0188
細胞培養(yǎng)操作：
1) 復蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主。
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。
2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當顯微鏡下細胞形態(tài)和生長密度達到90%時，進行傳代。（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細胞懸液吸至離心管內，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細胞，吹打細胞使其均勻分散。
（7）吸棄細胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。
（9）細胞凍存。
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