操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內完全解凍，使細胞能盡快通過*易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌；部分產(chǎn)品現(xiàn)貨，超低比價，產(chǎn)品名稱貨期短，價格優(yōu)，售后齊全。本公司僅用于科研實驗。
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
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肝外膽管上皮細胞 |
5×105 |
FS-X019806 |
產(chǎn)品名稱：肝外膽管上皮細胞
產(chǎn)品規(guī)格：5×105
貨號：BH-X019806
產(chǎn)品類型：原代細胞
單位：T25/瓶
提供細胞鑒定：提供**熒光鑒定報告
保存培養(yǎng)溫度（℃）：37
運輸溫度（℃）：常溫
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
主要功能：
（1）血管平滑肌細胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。
（2）表達鈣通道及ICAM-1和VCAM-1，參與血管壁的炎癥反應。
（3）與血管的進展和穩(wěn)定有關。
生理變化：
（1）主動脈硬化。
（2）主動脈瘤
（3）主動脈鈣化。
基本特性：
（1）組織來源于正常大鼠大動脈組織。
（2）鑒定：肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色。
（3）原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（4）每凍存管細胞數(shù)：>5×105 cells/1ml。
（5）肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色驗證。
（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、酵母。
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培養(yǎng)步驟：
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
****擴張性共濟失調癥突變蛋白抗體 Anti-ATM0.1ml
鈣離子ATP酶通道蛋白抗體 Anti-ATP2c1/Ca++ ATPase0.1ml
活化轉錄因子6抗體 Anti-ATF60.1ml
氫鉀ATP酶通道蛋白抗體 Anti-ATP4B/H+K+ ATPase0.1ml
ATP合成酶H+轉運線粒體F0復合體亞基F6抗體 Anti-ATP5j0.1ml
銅轉運蛋白質α鏈抗體 Anti-ATP7A0.1ml
吸引素抗體 Anti-ATRN0.1ml
肝外膽管上皮細胞Ets變異體2(ETV2)elisa檢測試劑盒英文名稱：ETV2 ELISA Kit，英文縮寫：ETV2，產(chǎn)品別名：Ets變異體2(ETV2)ELISA檢測試劑盒，Ets變異體2(ETV2)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
C-Mer原癌基因酪氨酸激酶(MERTK)elisa檢測試劑盒英文名稱：MERTK ELISA Kit，英文縮寫：MERTK，產(chǎn)品別名：C-Mer原癌基因酪氨酸激酶(MERTK)ELISA檢測試劑盒，C-Mer原癌基因酪氨酸激酶(MERTK)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
Dachsous2蛋白(DCHS2)elisa檢測試劑盒英文名稱：DCHS2 ELISA Kit，英文縮寫：DCHS2，產(chǎn)品別名：Dachsous2蛋白(DCHS2)ELISA檢測試劑盒，Dachsous2蛋白(DCHS2)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
B-瘤因子8(Bcl8)elisa檢測試劑盒英文名稱：Bcl8 ELISA Kit，英文縮寫：Bcl8，產(chǎn)品別名：B-瘤因子8(Bcl8)ELISA檢測試劑盒，B-瘤因子8(Bcl8)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
Atlastin2蛋白(ATL2)elisa檢測試劑盒英文名稱：ATL2 ELISA Kit，英文縮寫：ATL2，產(chǎn)品別名：Atlastin2蛋白(ATL2)ELISA檢測試劑盒，Atlastin2蛋白(ATL2)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
Abl交互子3(ABI3)elisa檢測試劑盒英文名稱：ABI3 ELISA Kit，英文縮寫：ABI3，產(chǎn)品別名：Abl交互子3(ABI3)ELISA檢測試劑盒，Abl交互子3(ABI3)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
Ⅰ類主要組織相容性復合體E(MHCE)elisa檢測試劑盒英文名稱：MHCE ELISA Kit，英文縮寫：MHCE，產(chǎn)品別名：Ⅰ類主要組織相容性復合體E(MHCE)ELISA檢測試劑盒，Ⅰ類主要組織相容性復合體E(MHCE)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
3',5'-二磷酸核苷酸酶1(BPNT1)elisa檢測試劑盒英文名稱：BPNT1 ELISA Kit，英文縮寫：BPNT1，產(chǎn)品別名：3',5'-二磷酸核苷酸酶1(BPNT1)ELISA檢測試劑盒，3',5'-二磷酸核苷酸酶1(BPNT1)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
組織多肽抗原(TPA)elisa檢測試劑盒英文名稱：TPA ELISA Kit，英文縮寫：TPA，產(chǎn)品別名：組織多肽抗原(TPA)ELISA檢測試劑盒，組織多肽抗原(TPA)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
轉谷氨酰胺酶2C多肽(TGM2)elisa檢測試劑盒英文名稱：TGM2 ELISA Kit，英文縮寫：TGM2，產(chǎn)品別名：轉谷氨酰胺酶2C多肽(TGM2)ELISA檢測試劑盒，轉谷氨酰胺酶2C多肽(TGM2)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
腫瘤標志物(CA724)elisa檢測試劑盒英文名稱：CA724 ELISA Kit，英文縮寫：CA724，產(chǎn)品別名：腫瘤標志物(CA724)ELISA檢測試劑盒，腫瘤標志物(CA724)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。