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貨號 |
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小鼠結腸癌細胞熒光素酶標記 |
1×106 |
FS-X019656 |
產品名稱：小鼠結腸癌細胞熒光素酶標記
產品英文：CT26+LUC
貨號：BH-X019656
細胞培養(yǎng)條件：1640+10%FBS+1%P/S
生長狀態(tài)：貼壁生長
產品規(guī)格：1×106
單位：T25/瓶
是否提供細胞STR鑒定：不提供STR鑒定報告
保存培養(yǎng)溫度（℃）37
運輸溫度（℃）：常溫
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
主要功能：
（1）血管平滑肌細胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。
（2）表達鈣通道及ICAM-1和VCAM-1，參與血管壁的炎癥反應。
（3）與血管的進展和穩(wěn)定有關。
生理變化：
（1）主動脈硬化。
（2）主動脈瘤
（3）主動脈鈣化。
基本特性：
（1）組織來源于正常大鼠大動脈組織。
（2）鑒定：肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色。
（3）原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（4）每凍存管細胞數：>5×105 cells/1ml。
（5）肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色驗證。
（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、酵母。
培養(yǎng)步驟：
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
半胱胺酸蛋白酶蛋白-3抗體 Anti-Caspase-3/CPP32/SCA-1 0.1ml
半胱胺酸蛋白酶蛋白-6抗體 Anti-Caspase-6 0.1ml
半胱氨酸蛋白酶8抗體 Anti-Caspase-8 0.1ml
白介素1-β轉化酶樣凋亡蛋白酶6抗體 Anti-Caspase-9 0.1ml
β-連環(huán)蛋白抗體 Anti-β-catenin/β-cats 0.1ml
核凋亡誘導因子蛋白1Anti-NAIF1 protein 0.2ml
成骨特異性轉錄因子抗
小鼠結腸癌細胞熒光素酶標記苯乙肼裂解酶(NRD1)elisa檢測試劑盒英文名稱：NRD1 ELISA Kit，英文縮寫：NRD1，產品別名：苯乙肼裂解酶(NRD1)ELISA檢測試劑盒，苯乙肼裂解酶(NRD1)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
白介素8受體α(IL8Rα)elisa檢測試劑盒英文名稱：IL8Rα ELISA Kit，英文縮寫：IL8Rα，產品別名：白介素8受體α(IL8Rα)ELISA檢測試劑盒，白介素8受體α(IL8Rα)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
半乳糖變旋酶(GALM)elisa檢測試劑盒英文名稱：GALM ELISA Kit，英文縮寫：GALM，產品別名：半乳糖變旋酶(GALM)ELISA檢測試劑盒，半乳糖變旋酶(GALM)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
白介素1θ(IL1θ)elisa檢測試劑盒英文名稱：IL1θ ELISA Kit，英文縮寫：IL1θ，產品別名：白介素1θ(IL1θ)ELISA檢測試劑盒，白介素1θ(IL1θ)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
安定結合抑制因子(DBI)elisa檢測試劑盒英文名稱：DBI ELISA Kit，英文縮寫：DBI，產品別名：安定結合抑制因子(DBI)ELISA檢測試劑盒，安定結合抑制因子(DBI)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
α-內啡肽(αEP)elisa檢測試劑盒英文名稱：αEP ELISA Kit，英文縮寫：αEP，產品別名：α-內啡肽(αEP)ELISA檢測試劑盒，α-內啡肽(αEP)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
VI型膠原(COL6)elisa檢測試劑盒英文名稱：COL6 ELISA Kit，英文縮寫：COL6，產品別名：VI型膠原(COL6)ELISA檢測試劑盒，VI型膠原(COL6)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
TNF受體關聯因子5(TRAF5)elisa檢測試劑盒英文名稱：TRAF5 ELISA Kit，英文縮寫：TRAF5，產品別名：TNF受體關聯因子5(TRAF5)ELISA檢測試劑盒，TNF受體關聯因子5(TRAF5)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
Snail同源物1(SNAI1)elisa檢測試劑盒英文名稱：SNAI1 ELISA Kit，英文縮寫：SNAI1，產品別名：Snail同源物1(SNAI1)ELISA檢測試劑盒，Snail同源物1(SNAI1)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
S100鈣結合蛋白A14(S100A14)elisa檢測試劑盒英文名稱：S100A14 ELISA Kit，英文縮寫：S100A14，產品別名：S100鈣結合蛋白A14(S100A14)ELISA檢測試劑盒，S100鈣結合蛋白A14(S100A14)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
RAD1同源物(RAD1)elisa檢測試劑盒英文名稱：RAD1 ELISA Kit，英文縮寫：RAD1，產品別名：RAD1同源物(RAD1)ELISA檢測試劑盒，RAD1同源物(RAD1)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內完全解凍，使細胞能盡快通過*易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。