產(chǎn)品名稱：豬藍耳病病毒PCR檢測試劑盒

產(chǎn)品及特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：豬藍耳病病毒PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號：FS-P63680
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機型決定，具體見使用方法）。

實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，必須設(shè)置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進行）
10. 如果只做1次重復(fù)，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

阿德福韋/阿德福韋酯 Adefovir dipivoxil 142340-99-6 質(zhì)量規(guī)格：>99%,可用于細胞培養(yǎng)

真/酵母氨含量熒光定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

酵母腺苷脫氨酶（ADA）定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

細胞短鏈羥脂酰輔酶A脫氫酶（HYDROXYACYL COA DEHYDROGENASE）活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

TMS-咪唑(=N-基硅基咪唑)(>98.0%(T)) TMS-Imidazole (=N-Trimethylsilylimidazole) 18156-74-6 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

721型分光光度儀1毫升1厘米光徑塑料比色皿 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：1個

動物細胞β-半乳糖苷酶活性化學發(fā)光法定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

氯化鈀 Palladium (II) chloride 2099324 質(zhì)量規(guī)格：BC

霜霉威(分析標準品,99%) Propamocarb 24579-73-5 質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,99%

組胺素5 Histatin 5 104339-66-4 質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

硬脂酸鋁 Aluminum stearate 637-12-7 質(zhì)量規(guī)格：AR

小鼠PDGFβ基因甲基化檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

細胞培養(yǎng)液氧化應(yīng)激活性氧（ROS）紅色熒光測定試劑盒（超氧陰離子） 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

甲磺酸伊馬替尼（標準品） Imatinib Mesylate 220127-57-1 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品

組織總抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量檢測試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：50次

橙黃Ⅳ Orange Ⅳ 554-73-4 質(zhì)量規(guī)格：IND

豬藍耳病病毒PCR檢測試劑盒CIN-1培養(yǎng)基基礎(chǔ) 英文名稱：Cepulodin Irgasan Novobiocin Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于分離小腸結(jié)腸炎耶爾森氏用途用于分離小腸結(jié)腸炎耶爾森氏。成分（g/L）胰蛋白胨 20.0g酵母粉 2.0g甘氯醇 20.0g氯鈉 1.0g去氧膽酸鈉 2.0g硫酸鎂 0.01g瓊 脂 12.0gIrgsan 0.004g中性紅 0.03g結(jié)晶紫 0.001g氯鍶 1.0gPH值 7.5±0.1用 法稱取本品 58.0克，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，分裝三角瓶,每瓶200ml， 121℃高壓滅15分鐘，冷至50℃左右時，加入一支過濾除的CIN-1添加劑（含頭孢素3mg，新生霉素0.5mg），混勻，傾入無平皿。

改良Y培養(yǎng)基 英文名稱：Agar Y，Modified 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于分離小腸結(jié)腸炎耶爾森氏用途:用于分離小腸結(jié)腸炎耶爾森氏。成分(g/L)蛋白胨 15.0氯鈉 5.0乳糖 10.0草酸鈉 2.0去氧膽酸鈉 6.0三號膽鹽 5.0酸鈉 2.0孟加拉紅 0.04水解酪蛋白 5.0瓊脂 17.0pH值7.4±0.1 25℃用法稱取本品 67.0g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅 15 分鐘,待冷至 45-50℃時,傾入無平皿。

改良磷酸鹽緩沖液PSB 英文名稱：Phosphate Saline Buffer,Modified 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于小腸結(jié)腸炎耶爾森氏增培養(yǎng)用途:用于檢測小腸結(jié)腸炎耶爾森氏時樣品制備或增培養(yǎng)。成分(g/L)磷酸氫二鈉 8.23磷酸二氫鈉 1.2山梨醇 10.0氯鈉 5.03號膽鹽 1.5pH值7.6 ± 0.2 25℃用法稱取本品 25.93g ,加熱攪拌溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝 ,每瓶 225ml,121℃高壓滅 15 分鐘,備用。

ITC肉湯 英文名稱：ITC Broth 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于耶爾森氏的選擇性培養(yǎng)增用途:用于耶爾森氏的選擇性培養(yǎng)增成分(g/L)胰蛋白胨 10.0酵母浸粉 1.0硫酸鎂(6H2O) 60.0氯鈉 5.0孔雀石綠 0.01pH值6.9±0.2用法稱取本品 44.0g,加熱攪拌溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝每瓶 100ml,121℃高壓滅15 分鐘,冷至 45±5℃時,每 100ml 培養(yǎng)基中無操作加入 1 支 ITC 添加劑,混勻,備用。

CIN-1添加劑 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：1ml*5 產(chǎn)品用途：每支添加于200ml每支添加于200ml CIN-I培養(yǎng)基基礎(chǔ)中

ITC肉湯添加劑 英文名稱：ITC Broth Additive 產(chǎn)品規(guī)格：1ml*5 產(chǎn)品用途：每支添加于100mlITC肉湯中與培養(yǎng)基配套使用，每支添加于100mlITC肉湯中

SSDC培養(yǎng)基（ISO） 英文名稱：SSDC Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于小腸結(jié)腸耶爾森氏的分離培養(yǎng)用途:用于小腸結(jié)腸炎耶爾森氏的分離培養(yǎng)。用法稱取本品 77.0g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,冷至45-50℃時,傾入無平皿,備用。無需高壓滅。

改良克氏雙糖鐵培養(yǎng)基 英文名稱：Modified KIA Iron Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：生化培養(yǎng)基，用于小腸結(jié)腸炎耶爾森氏的生化反應(yīng)篩選用途:用于細復(fù)合生化實驗(葡萄糖、山梨醇)。成分(g/L)酵母粉 3.0蛋白胨 15.0牛肉粉 3.0月示蛋白胨 5.0氯鈉 5.0山梨醇 20.0葡萄糖 1.0硫酸亞鐵 0.2硫代硫酸鈉 0.3瓊脂 13.0酚紅 0.024pH值7.4 ± 0.2 25℃用法稱取本品 65.52g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝于試管,121℃高壓滅 15分鐘,備用。

CIN-1瓊脂平板9cm 英文名稱：Cepulodin Irgasan Novobiocin Agar 產(chǎn)品規(guī)格：10個/包 產(chǎn)品用途：用于分離小腸結(jié)腸炎耶爾森氏用于分離小腸結(jié)腸炎耶爾森氏