實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
產(chǎn)品及特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：丙型肝炎病毒PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：48T
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-P63666
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定，具體見使用方法）。
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對(duì)照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對(duì)照。
2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號(hào)管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對(duì)照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對(duì)照的第4號(hào)（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號(hào)（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）
10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照，6個(gè)用于PCR陽性對(duì)照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照，并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加）
二氫睪酮,雄諾龍 Stanolone/Androstanolone 521-18-6 質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR
組織BTK激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C） 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
組織葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）活性酶動(dòng)力比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：50次
植物DNA甲基轉(zhuǎn)移酶-1（MET-1）活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
1,3-二咖啡酰奎寧酸(標(biāo)準(zhǔn)品) Cynarin 1182-34-9 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
轉(zhuǎn)基因棉花MON531品系基因檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
咖啡甘素（dulcin）含量高效液相色譜法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
細(xì)胞CDK3/CYCLIN E激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C） 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
D-環(huán)丙基丙氨酸 D-Cyclopropylalanine 121786-39-8 質(zhì)量規(guī)格：BR
植物F型氫ATP酶（H＋－ATPase）活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
細(xì)胞可溶性總核蛋白制備試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
分子篩4A(2mm-3mm,干燥劑用 ) Molecular sieves, 4 ? 70955-01-0 質(zhì)量規(guī)格：2mm-3mm,干燥劑用
草毒死（標(biāo)準(zhǔn)品） Allidochlor 93-71-0 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品
動(dòng)物組織線粒體F型ATP酶（F type ATPase）活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次
腎臟髓質(zhì)肽（22-52），人 Adrenomedullin (22-52),human 159899-65-7 質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR
BES free acid; N,N-(2-羥乙基)-2-氨基乙磺酸 BES free acid 10191-18-1 質(zhì)量規(guī)格：>99%
丙型肝炎病毒PCR檢測試劑盒LG培養(yǎng)基 英文名稱：(Linden Grain Medium) 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于霉、酵母、耐熱霉及細(xì)總數(shù)的檢測，可用于PET瓶及無罐裝生產(chǎn)線的無驗(yàn)證。用途：用于霉、酵母、耐熱霉及細(xì)總數(shù)的檢測，可用于PET瓶及無罐裝生產(chǎn)線的無驗(yàn)證。成分：胰蛋白胨 、葡萄糖、酵母浸粉、硫酸銨、磷酸二氫鉀、硫酸鎂使用方法 ：稱取本品29.5g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝試管或三角瓶，121℃ 滅15min。質(zhì)量控制 ：配成的LG培養(yǎng)基為透明液體，質(zhì)控株接種后于28～32℃ 培養(yǎng)3~5天，結(jié)果如下：貯 存 ：貯存于避光、陰涼干燥處，用后立即旋緊瓶蓋。貯存期三年。
種培養(yǎng)基 英文名稱：Strain Medium(for B.Cereus) 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于四環(huán)素檢定中蠟樣芽孢桿的培養(yǎng)(SN標(biāo)準(zhǔn))產(chǎn)品用途：用于四環(huán)素檢定中蠟樣芽孢桿的培養(yǎng)(SN標(biāo)準(zhǔn))產(chǎn)品用法：稱取本品31.5克，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，121℃高壓滅15分鐘備用。
四環(huán)素檢定瓊脂 英文名稱：Tetracyline Examination Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于四環(huán)素殘留的微生物學(xué)檢定(SN標(biāo)準(zhǔn))產(chǎn)品用途：用于四環(huán)素殘留的微生物學(xué)檢定(SN標(biāo)準(zhǔn))產(chǎn)品用法：稱取本品24.5克，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，分裝三角瓶，121℃高壓滅15分鐘，備用。
葡萄糖胰蛋白胨瓊脂 英文名稱：Glucose Tryptone Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于嗜熱芽孢(需氧芽孢總數(shù),平酸芽孢和厭氧芽孢)分離培養(yǎng)(SN標(biāo)準(zhǔn))用途:用于嗜熱芽孢( 需氧芽孢總數(shù)、平酸芽孢和厭氧芽孢 )的分離培養(yǎng)。成分(g/L)胰酪蛋白胨 10.0葡萄糖 5.0瓊脂 15.0溴紫 0.04pH值6.7 ± 0.1 25℃用法稱取本品 30.0g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,121℃高壓滅 15 分鐘,備用。
蛋白胨鹽溶液 英文名稱：Peptone Salt Solution 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于嗜冷需氧芽孢及嗜熱需氧芽孢數(shù)測定用稀釋液用途:用于嗜冷、需氧芽孢及嗜熱需氧芽孢數(shù)測定用稀釋液。用法稱取本品 9.5g,加熱溶解 于 1000ml 蒸餾水中,分裝試管或燒瓶,每管 9ml、每瓶 90ml 或 225ml,121℃高壓滅 15 分鐘,備用。
檢定培養(yǎng)基 英文名稱：Test Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于嗜熱脂肪芽孢桿檢定培養(yǎng)用途:用于嗜熱脂肪芽孢桿檢定培養(yǎng)。成分(g/L)牛肉膏 3.0蛋白胨 5.0大豆蛋白胨 0.3葡萄糖 5.25氯鈉 0.5磷酸氫二鉀 0.25吐溫-80 1.0溴紫 0.06瓊脂 15.0pH值7.8 ± 0.2 25℃用法稱取本品 30.36g ,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝每瓶 100ml,121℃高壓滅 15 分鐘。
種芽孢培養(yǎng)基 英文名稱：Bacillus Bacteria Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于嗜熱脂肪芽孢桿芽孢培養(yǎng)用途:用于嗜熱脂肪芽孢桿芽孢培養(yǎng)。用法稱取本品 47.5g ,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝300ml 于克氏瓶內(nèi),121℃高壓滅 15 分鐘。
細(xì)保存培養(yǎng)基 英文名稱：Bacterial Storage Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于嗜熱脂肪芽孢桿種保存用途:用于嗜熱脂肪芽孢桿種保存。用法稱取本品 40.0g ,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝試管,121℃高壓滅 15 分鐘,制成斜面。
BAT培養(yǎng)基 英文名稱：BAT Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于檢測果汁中耐熱嗜酸用途:用于果汁中耐熱嗜酸檢測。用法稱取本品 29.0g,加熱溶解于 1000ml 蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅 15分鐘,冷至 45-50℃時(shí),加入適量無 1 N Hcl 或 1 NH2SO4 調(diào)整 pH 值至 4.0±0.2,混勻,傾入無平皿,備用。
肝肉瓊脂培養(yǎng)基 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g 產(chǎn)品用途：用于鹽還原厭氧孢子的計(jì)數(shù)用法：稱取本品34.87g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，分裝，121℃高壓滅15min，備用