產(chǎn)品詳情
  • 產(chǎn)品名稱(chēng):甲型H1N1流感病毒(2009)PCR檢測試劑盒?

  • 產(chǎn)品型號:FS-P63211
  • 產(chǎn)品**:撫生
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簡(jiǎn)單介紹:
甲型H1N1流感病毒(2009)PCR檢測試劑盒?注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時(shí)間;4.循環(huán)次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應動(dòng)力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。
詳情介紹:

產(chǎn)品及特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶(hù)只需要提供病毒樣品。
2. 根據保守序列設計的專(zhuān)一性引物,與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
參數規格:
產(chǎn)品名稱(chēng):甲型H1N1流感病毒(2009)PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品規格:50T
產(chǎn)品貨號:FS-P63211
產(chǎn)品規格:50T
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):本產(chǎn)品就是根據保守區設計引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX(根據機型決定,具體見(jiàn)使用方法)。

實(shí)驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗前請充分溝通確認實(shí)驗方案和樣本情況;
2)客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗的背景信息、物種、基因準確的名稱(chēng)和ID號;
3)客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監測整個(gè)PCR進(jìn)程,通過(guò)標準曲線(xiàn)對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi),探針類(lèi)是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設計的引物來(lái)指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
實(shí)驗過(guò)程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、稀釋PCR陽(yáng)性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對照。
2. 標記6個(gè)離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽(yáng)性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個(gè)樣品,必須設置N+2個(gè)提取,多出的一個(gè)是PC(樣品制備陽(yáng)性對照),一個(gè)是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?0μL上步制備的PCR陽(yáng)性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當于1萬(wàn)拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當于10萬(wàn)拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應(20 μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
10. 如果只做1次重復,則標記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對照,6個(gè)用于PCR陽(yáng)性對照。如果做2-3次重復,則反應設置數量相應增加2或3倍。
11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽(yáng)性對照,并且陽(yáng)性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加)
醛縮酶2抗體
胰腺α淀粉酶抗體
錨蛋白重復結構域蛋白11抗體
磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體
磷酸化活化復制因子2抗體
醛固酮還原酶家族1成員D1抗體
肝血管**素相關(guān)蛋白抗體
自水解酶結構域5蛋白抗體
?;o酶A硫酯酶8
溶血磷脂酸?;D移酶β抗體
AFP4b蛋白抗體
載脂蛋白C2抗體
載脂蛋白A5抗體
載脂蛋白A2抗體
溶血磷脂酸?;D移酶D抗體
載脂蛋白E3抗體
ABI基因家族2抗體
氧化蛋白質(zhì)水解酶
鐵調節蛋白2抗體
乙醛脫氫酶1型抗體
AFP4a蛋白抗體
Rho GTP酶激活蛋白32抗體
能量平衡相關(guān)蛋白抗體
禽腦脊髓炎病毒AEV抗體

小鼠血管內皮生長(cháng)因子(mouse VEGF) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠血管內皮細胞生長(cháng)因子B(mouse VEGF-B) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠血管內皮細胞生長(cháng)因子C(mouse VEGF-C) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠血管內皮細胞生長(cháng)因子D(mouse VEGF-D) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠血管內皮細胞生長(cháng)因子受體1(mouse VEGF-R1) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠血管活性腸肽(mouse VIP) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠血管性血友病因子(mouse VWF) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠血管內皮生長(cháng)因子受體-2(mouse VEGF R2) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠軟骨糖蛋白39(mouse YKL-40) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠血管緊張素轉化酶(mouse ACE) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠雄**結合蛋白(mouse ABP) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
甲型H1N1流感病毒(2009)PCR檢測試劑盒小鼠促腎上腺皮質(zhì)**(mouse ACTH) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠Active Caspase-3 ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠Active Caspase-7 ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠Active Caspase-8 ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠激活素A(mouse Activin A) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠脂聯(lián)素(mouse Adiponectin) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠抗線(xiàn)粒體抗體(mouse AMA) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠抗核抗體(mouse ANA) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝
小鼠血管緊張素II(mouse ANG II) ELISA 48T/96T 進(jìn)口分裝


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