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熒光定量PCR染料法和探針法簡述
日期：2025-05-09 15:47
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摘要：
PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶鏈反應(yīng)）是一種在體外模擬DNA復(fù)制過程的技術(shù)。通過設(shè)計特異性引物，PCR可以擴增目標(biāo)DNA片段，使其在短時間內(nèi)達到可檢測的水平。PCR主要包括三個階段：變性、退火和延伸。熒光定量PCR原理：熒光定量PCR在傳統(tǒng)PCR基礎(chǔ)上，引入了熒光標(biāo)記技術(shù)。
根據(jù)熒光標(biāo)記物的不同，熒光定量PCR可分為兩種：染料法和探針法。
1、染料法
染料法利用一種能與雙鏈DNA特異性結(jié)合的熒光染料，如SYBR Green I。在PCR反應(yīng)體系中，染料與雙鏈DNA結(jié)合后，熒光信號增強。隨著PCR反應(yīng)的進行，擴增...
PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶鏈反應(yīng)）是一種在體外模擬DNA復(fù)制過程的技術(shù)。通過設(shè)計特異性引物，PCR可以擴增目標(biāo)DNA片段，使其在短時間內(nèi)達到可檢測的水平。PCR主要包括三個階段：變性、退火和延伸。熒光定量PCR原理：熒光定量PCR在傳統(tǒng)PCR基礎(chǔ)上，引入了熒光標(biāo)記技術(shù)。
根據(jù)熒光標(biāo)記物的不同，熒光定量PCR可分為兩種：染料法和探針法。
1、染料法
染料法利用一種能與雙鏈DNA特異性結(jié)合的熒光染料，如SYBR Green I。在PCR反應(yīng)體系中，染料與雙鏈DNA結(jié)合后，熒光信號增強。隨著PCR反應(yīng)的進行，擴增產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也隨之增強。通過實時監(jiān)測熒光信號的變化，可以計算出目標(biāo)DNA的初始濃度。
2、探針法
探針法采用一種特異性熒光標(biāo)記的探針，如TaqMan探針。探針的5'端標(biāo)記報告熒光基團，3'端標(biāo)記淬滅熒光基團。在探針完整時，報告熒光基團的熒光信號被淬滅基團抑制。當(dāng)PCR反應(yīng)進行到退火階段，探針與目標(biāo)DNA特異性結(jié)合，Taq酶的5'→3'外切酶活性將探針切斷，使報告熒光基團與淬滅熒光基團分離，熒光信號得以釋放。通過實時監(jiān)測熒光信號的變化，可以實現(xiàn)對目標(biāo)DNA的定量。