實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
睪丸表面有一層堅厚的纖維膜，稱為白膜。具有保護睪丸的作用。沿睪丸后緣白膜增厚，凸入睪丸內形成睪丸縱隔。從縱隔發(fā)出許多結締組織小隔，將睪丸實質分成許多睪丸小葉。其中結締組織主要是由成纖維細胞構成。
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組織來源 |
產品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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睪丸組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1379 |
僅供科研研究實驗 |
細胞特性：
1）組織來源于人的正常睪丸組織。
2)細胞鑒定：波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽性。
3)經鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式：長梭形，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 Delf原代成纖維細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產品：
大鼠疊氮胸苷(AZT)elisa檢測試劑盒
植物甲基化組蛋白H3-K9染色質沉淀分析（CHIP）試劑盒
小鼠促性腺釋放(GnRH)elisa檢測試劑盒
脯氨酸（PRO）含量測試盒
（無一抗和二抗）
上皮鈉離子通道蛋白D/δENaC抗體 Anti-SCNN1D
環(huán)指蛋白1抗體 Anti-RING1
親核素β1抗體 Anti-NTF97/KPNB1
鋅指蛋白307抗體 Anti-ZNF307
慢性粒細胞白血病相關蛋白抗體 KBTBD11
膜轉運蛋白XK抗體 XKR1
FBG4蛋白抗體 FBG4
FITC標記人CD58單克隆抗體 human CD58/FITC
嗅覺受體9G9抗體 OR9G9
血小板源性生長因子A相關蛋白2抗體 TUSC2
蛋白磷酸酶非受體型20抗體 PTPN20
第12號染色體開放閱讀框23抗體 C12orf23
髓樣細胞白血病-1抗體 MCL1
天青素/肝素結合蛋白單克隆抗體 Azurocidin/HBP
PXK蛋白抗體 PXK
RAS家族關聯(lián)結構域蛋白9抗體 PAMCI/RASF9
21號染色體開放閱讀框56抗體 SPATC1L
5號染色體開放閱讀框19抗體 C5orf19
肌微管素相關蛋白10抗體 MTMR10
堿性成纖維細胞生長因子受體1（CD331）單克隆抗體 FGFR1
冰凍切片氧化應激活性氧（ROS）原位熒光染色試劑盒（羥自由基）
人睪丸白膜成纖維細胞Rat L-Selectin ELISA kit
人骨保護素(OPG)elisa分析檢測試劑盒
IDUA_HUMAN; Alpha-L-iduronidase; IDA; Iduronidase alpha L; MPS1.
人睪丸白膜成纖維細胞
人腎小球系膜細胞
人支氣管上皮樣細胞；16HBE
NCI-H1838人非小細胞肺癌細胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經過的心臟破碎組織塊經過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據細胞數量種植到對應的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術等。