實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
小鼠氣管上皮細胞分離自氣管組織；氣管（Trachea），呼吸器官的一部分；為后壁略平的圓筒型管狀。上端平第六頸椎下緣，與環(huán)狀軟骨相連；向下至第四、五胸椎體（相當胸骨角平面）交界處，分左、右主支氣管，分叉處稱為氣管杈。氣管主要由14-16個半環(huán)狀軟骨構成，有彈性，軟骨為“C”字形的軟骨環(huán)，缺口向后，各軟骨環(huán)以韌帶連接起來，環(huán)后方缺口處由平滑肌和致密結締組織連接，保持了持續(xù)張開狀態(tài)。管腔襯以粘膜，表面覆蓋纖毛上皮，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空氣中的灰塵顆粒，纖毛不斷向咽部擺動將粘液與灰塵排出，以凈化吸入的氣體。氣管上皮是氣道與外界環(huán)境接觸的道防線，不僅是各種病原體、炎癥介質作用的靶細胞，還作為效應細胞合成、釋放多種炎性介質和細胞因子從而參與氣道炎癥及反應。體外培養(yǎng)的原代氣管上皮細胞因與體內(nèi)組織在形態(tài)結構和功能活動上存在很大的相似性，因此，在基礎及臨床研究中極為重要。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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氣管 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1765 |
僅供科研研究實驗 |
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介：
公司實驗室分離的小鼠氣管上皮細胞采用-中性蛋白酶混合消化法結合差速貼壁法，并通過上皮細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的小鼠氣管上皮細胞經(jīng)PCK熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品：
通用型雞鼠傷（ST）基因檢測試劑盒
組織AX1激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
人抵抗素(Resistin)elisa分析檢測試劑盒
大鼠復制蛋白A 70kDaDNA結合亞基(RPA1)elisa檢測試劑盒
乙醛脫氫酶（ALDH）試劑盒
小鼠中性粒細胞彈性蛋白酶(ELA2)elisa檢測試劑盒
大鼠腦紅蛋白(NGB)elisa檢測試劑盒
大量藍藻菌基因組DNA氯化銫萃取試劑盒
兔8-異構前列腺素(8-epi-PGF2α)elisa分析檢測試劑盒
乳糖酶根皮苷水解酶1抗體 LCT
上皮細胞癌轉化蛋白2抗體 ECT2
LYSMD4蛋白抗體 LYSMD4
MRVI1蛋白抗體 MRVI1
腫瘤壞死因子受體相關因子3相互作用蛋白1抗體 TRAF3IP1
軸索過度生長抑制因子B抗體 Nogo B
睪丸特異蛋白酶樣蛋白50抗體 TSP50
骨形態(tài)發(fā)生蛋白15抗體 BMP15
線粒體核糖體蛋白S24抗體 MRPS24
小腦變性相關蛋白2抗體 CDR2
巴豆酰組蛋白H2B重組兔單克隆抗體 Histone H2B (Crotonyl-Lys15 / Lys16 / Lys20)
白血病抑制因子抗體 LIF
CD27重組兔單克隆抗體 CD27
COPT2抗體 COPT2
磷酸化220kDa蛋白激酶D相互作用蛋白抗體 phospho-Kidins220 (Ser918)
磷酸化蛋白激酶9抗體 phospho-PTK9 (Tyr321)
小鼠可溶性E選擇素(sE-selectin)elisa檢測試劑盒
小鼠氣管上皮細胞大鼠S100蛋白(S-100)elisa檢測試劑盒
透射電鏡（TEM）制片處理包埋液
Alpha L iduronate sulfate sulfatase; Alpha-L-iduronate sulfate sulfatase; AW214631; Ids; IDS_HUMAN; Iduronate 2 sulfatase 14 kDa chain; Iduronate 2 sulfatase 42 kDa chain; Iduronate 2 sulfatase; Iduronate 2-sulfatase 14 kDa chain; Iduronate sulfatase; Idursulfase; MPS2; RP23-29M4.1; SIDS.
小鼠前列腺成纖維細胞
兔前脂肪細胞
RM-1小鼠前列腺癌細胞
Ishikawa人內(nèi)膜腺癌細胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術等。