產(chǎn)品名稱：J774A.1小鼠單核巨噬細(xì)胞

細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細(xì)胞計數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	J774A.1小鼠單核巨噬細(xì)胞	英文名稱	J774A.1:J774A1
產(chǎn)品貨號	A01X1063	培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%
生長特性	貼壁細(xì)胞，不用胰酶消化	細(xì)胞形態(tài)	單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	小鼠	凍存條件	凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
組織來源	巨噬細(xì)胞	用途	僅供科研研究實驗

商品詳情：

生長特性 貼壁細(xì)胞，不用yi酶消化

細(xì)胞形態(tài) 單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞樣

生長培養(yǎng)基 DMEM＋10% FBS＋1% P/S

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

注意事項 1、該細(xì)胞不建議使用yi酶消化，yi酶會刺激分化； 2、 超過3天不傳代細(xì)胞容易分化； 3、 培養(yǎng)時，存在少量分化細(xì)胞，屬于正常現(xiàn)象。

背景描述 J774A.1細(xì)胞來源于BABL/cN小鼠，有抗體依賴的吞噬作用，生長受硫酸葡聚糖、PPD和LPS的抑制；J774A.1細(xì)胞可產(chǎn)生IL-1β和大量的溶jun酶。

年齡（性別） 成年

組織來源 巨噬細(xì)胞

細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞

腫瘤類型 肉瘤細(xì)胞

生物等級 1

倍增時間 ~17 hours

受體表達情況 Complement (C3), expressed;Fc receptor, IgG, high affinity I (Fcgr1), expressed

保藏機構(gòu) ATCC; TIB-67 DSMZ; ACC-170 ECACC; 91051511

FBG4蛋白抗體 FBG4       FITC標(biāo)記人CD58單克隆抗體 human CD58/FITC

嗅覺受體9G9抗體 OR9G9       血小板源性生長因子A相關(guān)蛋白2抗體 TUSC2

慢性粒細(xì)胞白血病相關(guān)蛋白抗體 KBTBD11       膜轉(zhuǎn)運蛋白XK抗體 XKR1

髓樣細(xì)胞白血病-1抗體 MCL1       天青素/肝素結(jié)合蛋白單克隆抗體 Azurocidin/HBP

21號染色體開放閱讀框56抗體 SPATC1L       5號染色體開放閱讀框19抗體 C5orf19

蛋白酪氨酸磷酸酶非受體型20抗體 PTPN20       第12號染色體開放閱讀框23抗體 C12orf23

PXK蛋白抗體 PXK      RAS家族關(guān)聯(lián)結(jié)構(gòu)域蛋白9抗體 PAMCI/RASF9

肌微管素相關(guān)蛋白10抗體 MTMR10       堿性成纖維細(xì)胞生長因子受體1（CD331）單克隆抗體 FGFR1細(xì)胞N-乙酰轉(zhuǎn)移酶（NAT）活性比色法定量檢測試劑盒       小鼠10kDa干擾素γ誘導(dǎo)蛋白(IP-10)elisa檢測試劑盒

人二氫嘧啶酶樣2(DPYSL2)elisa分析檢測試劑盒       DPYSL2ELISAKit

冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧（ROS）原位熒光染色試劑盒（羥自由基）       大鼠纖維蛋白肽A(FPA)elisa檢測試劑盒

牛elisa檢測試劑盒       植物胱硫醚-γ-合成酶（cystathionine γ-synthase；CGS）活性熒光定量檢測試劑盒

小鼠抗胰蛋白酶(AT)elisa分析檢測試劑盒       大鼠疊氮胸苷(AZT)elisa檢測試劑盒

植物甲基化組蛋白H3-K9染色質(zhì)沉淀分析（CHIP）試劑盒       小鼠促性腺釋放(GnRH)elisa檢測試劑盒

J774A.1小鼠單核巨噬細(xì)胞脯氨酸（PRO）含量測試盒       （無一抗和二抗）

猴催乳素(PRL/LTH)elisa分析檢測試劑盒       PRL/LTH ELISA Kit

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長密度達到90%時，進行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。
（9）細(xì)胞凍存。